10. Мониторинг гигиены.

Согласно новому косметическому законодательству ЕС, при производстве косметической продукции должны соблюдаться принципы надлежащей про­изводственной практики (GMP). Создан межгосударственный стандарт ISO 22716, который регулирует применение правил GMP в Еврозоне. Испания -единственная страна Еврозоны, в законодательстве которой существует по­становление о GMP в косметическом секторе.

В 1992 году в перечне норм производства косметической продукции (GMP в косметической сфере), опубликованном немецкой ассоциацией парфюме­рии, косметики и средств личной гигиены (IKW), было впервые рекомендо­вано проводить микробиологические исследования качества сырья, нерас-фасованной и готовой продукции, а также регулярно проводить проверки санитарно-гигиенического состояния на производстве. В 1995 году была опу­бликована отредактированная версия директивы 1992 года, а в 1997 году ди­ректива была дополнена контрольным перечнем вопросов для самооценки. Теперь в директиве были указаны не только предельно допустимые значения общего числа бактерий, но и основные меры по борьбе с контаминацией, при­меняемые в случае превышения предельно допустимых значений.

«Регламент (ЕС) № 1223/2009 Европейского парламента и Совета» от 30 ноября 2009 г. о косметической продукции, опубликованный в «Офици­альном журнале Европейского Союза» 22.12.2009 за № L342M и полностью применяется, начиная с 11 июля 2013 г., не определяет какие-либо микро­биологические требования, но Статья 8 Регламента ЕС «Надлежащая произ­водственная практика», требует соответствия производства принятым в ЕС стандартам, которым, в частности и является ISO 22716.

Директивы IKW, как и прочие рекомендации по надлежащей производ­ственной практике, например, рекомендации Colipa и Совета Европы, остав­ляют выбор методов и мер реализации принципов GMP на усмотрение про­изводителя. Тот же принцип соблюдается и при выборе методов мониторинга гигиены, гарантирующих безопасность продукции и соблюдение норм GMP.

Итак, при разработке программ мониторинга гигиены в соответствии с требованиями GMP производители косметической продукции получают зна­чительную свободу действия. Отсутствие строгих правил способствует ис­пользованию новых технологий, как в производственном процессе, так и при осуществлении контроля качества. Новые технологии приводят к новым ме­тодам работы, и эти методы также активно включаются в производственный процесс. Для того, чтобы свобода действия была употреблена во благо, разра­боткой санитарно-гигиенической концепции и осуществлением мониторинга гигиены должны заниматься только специально обученные, квалифицирован­ные сотрудники.

При мониторинге промышленной гигиены с упором на концепцию микро­биологической безопасности нужно уделять особое внимание следующим па­раметрам:

- Сотрудники

- Производственные помещения

*Служебные помещения

*Складские помещения для хранения сырья, нерасфасованной и готовой продукции

*Помещения для подготовки продуктов

*Производственные помещения и зоны расфасовки

- Промышленные установки (производственные системы и наполнитель-но-фасовочные системы, системы обработки воды и т.д.) и оборудование.

- Упаковочные материалы

- Сырьё

- Средства для очистки и дезинфекции

- Вода (используется как сырьё и как средство для очистки)

- Воздух.

Мониторинг гигиены проводится для того, чтобы удостовериться в вы­полнении требований к чистоте помещений (в частности, нужно предотвра­щать образование пыли и контаминацию продуктов, а также полностью вы­чищать остатки изготовляемых продуктов). Кроме того, мониторинг гигиены позволяет отслеживать эффективность выполнения мер по обеспечению ми­кробиологической безопасности. Мониторинг гигиены позволяет оперативно выявлять слабые места и пробелы в санитарно-гигиенической системе заво­да, оповещать об этих пробелах руководство завода, а также разрабатывать и реализовывать меры по укреплению санитарно-гигиенической системы. Микробиологический контроль санитарно-гигиенического состояния завода - часть системы обеспечения качества, поэтому он должен носить предупре­дительный характер. Проверки санитарно-гигиенического состояния позво­ляют контролировать уровень гигиены на производстве и тем самым предот­вращать микробиологическую контаминацию.

10.1. Методы.

Выбор методов мониторинга промышленной гигиены зависит от типа ис­следуемых материалов и продуктов, а также от технических возможностей лаборатории. При выборе метода особенно важно учесть, какова его пред­полагаемая стоимость, насколько точными должны быть измерения (количе­ственный или качественный анализ, допустимая погрешность при измерении и т.д.), и как долго анализ проводится. Кроме того, важно учесть уровень ква­лификации сотрудников, требуемый для проведения анализ. Особенно этот параметр важен в том случае, если анализы будут проводить не специалисты в области микробиологии, а среднеквалифицированные работники.

В дополнение к многочисленным микробиологическим методам монито­ринга промышленной гигиены существуют простые вспомогательные меры по оценке санитарно-гигиенического состояния. Одна из таких мер - визуаль­ная проверка поверхностей и компонентов производственных систем, обра­батывающих производимый продукт. Важно убедиться, что в осматриваемых зонах нет пыли, грязи или остатков продуктов, оставшихся после плохо про­веденной уборки. Для проведения визуальной инспекции не нужно специ­альной квалификации, её может проводить любой сотрудник, в том числе и сотрудники, занимающиеся уборкой помещений.

Мониторинг промышленной гигиены осуществляют с помощью следую­щих микробиологических методов:

А. Культуральные методы

Метод агаровых контактных чашек

Исследование смыва

Метод мембранных фильтров, глубинный посев или посев разливом на твердую среду

Б. Экспресс-методы Измерение биолюминесценции Измерение импеданса

10.1.1. Метод агаровых контактных чашек

Метод агаровых контактных чашек - один из самых распространённых методов микробиологического контроля в рамках мониторинга производ­ственной гигиены. Чашки с агаровым покрытием можно готовить самим или покупать у производителей. В настоящее время можно приобрести готовые агаровые чашки у нескольких фирм-производителей; в тексте упомянуты только некоторые из них, для примера.

Чашки RODAC (Replicate Organism Detection Agar Contact plates - агаровые контактные чашки для обнаружения размножения организмов) - это неболь­шие чашки с площадью поверхности около 20 см2, покрытые агаром с раз­личными добавками и предназначенные для обнаружения бактерий и грибов. При определении общего числа мезофильных аэробных бактерий на поверх­ности используется особая среда: агар для подсчета общего микробного чис­ла (РСА).

Многие фирмы производят готовые слайд-тесты для идентификации ми­кроорганизмов:

У слайд-тестов Хигикульт (Schulke&Mayr) агаром покрыты обе стороны но­сителя, так что один слайд-тест можно использовать для проверки двух по­верхностей.

Система Biotest GK-A (Biotest) представляет собой плёнку, покрытую сло­ем агара. Тонкая и легко гнущаяся плёнка позволяет использовать эту систему для контакта с труднодоступными поверхностями. Ещё одно преимущество этой системы состоит в большей по сравнению с аналогами площади (25 см2).

При выборе среды следует учесть, что у разных типов микроорганизмов есть разные предпочтения к составу среды. Например, аэробные бактерии лучше растут на агаре для подсчета ОМЧ или на казеиново-соевом пептонном агаре, а грибы - на среде Сабуро. Необходимо удостовериться, что в среде содержатся соединения, инактивирующие дезинфицирующие средства и кон­серванты, иначе дезинфицирующие средства и консерванты замедлят рост бактерий. Для дезактивации в среду обычно добавляют смесь 3% твина-80, 0,3% лецитина, 0,1% гистидина и 0,5% тиосульфата натрия.

Для роста бактерий контактные чашки инкубируют при 30-35°С в течение 1-3 дней. Для роста грибов чашки инкубируют при 20-25°С не более недели.

Согласно методике агаровых контактных чашек, из одного микроорганиз­ма, находящегося на поверхности контакта, образуется одна колония на агаре, и, в идеале, этот метод позволяет выявить присутствие одной-единственной клетки на контактной поверхности. В том случае, когда контактная поверх­ность сильно загрязнена, колонии довольно быстро срастаются и покрывают всю поверхность чашки равномерным слоем, поэтому подсчитать количество колоний не удаётся. Сплошной слой клеток может образоваться на поверх­ности агара даже в том случае, если поверхность контакта не была сильно загрязнена: некоторые бактерии (например, представители рода Proteus или Bacillus) и прочие типы микроорганизмов (особенно плесневые грибы и псев­домонады) склонны к быстрому росту и формируют очень крупные колонии. В этом случае рекомендуется сократить время инкубации и проводить проме­жуточные подсчеты колоний в процессе инкубации. Метод агаровых контакт­ных чашек не рассчитан на адекватный анализ образцов, взятых с влажных поверхностей. При контакте с влажной поверхностью на поверхности агара образуется тонкая плёнка жидкости, в которой бактерии могут двигаться. Из-за этого образуются сателлитные колонии, и чашки зарастают ровным слоем. Кроме того, твердые питательные среды, контактирующие с влажной поверх­ностью, хуже адсорбируют бактерии.

Из сказанного выше следует ещё один вывод: перед осуществлением кон­такта с исследуемой поверхностью поверхность твердой питательной среды необходимо высушить (например, если чашки были недавно обработаны ага­ром и хранились на холоде).

Качество контакта зависит от свойств исследуемой поверхности. Метод контактных чашек прекрасно подходит для анализа гладких, плоских поверх­ностей. Изогнутые или неровные поверхности не поддаются анализу с помо­щью этого метода.

Все разновидности метода контактных чашек имеют одну общую особен­ность: при анализе охватывается только небольшая часть поверхности (9-25 см2). Использование этого метода, по сути своей, является анализом случай­ной выборки и не позволяет получить количественные данные об уровне кон­таминации на всей исследуемой поверхности.

10.1.2. Смывы тампоном

При осмотре труднодоступных участков и компонентов систем (манжет, резьбы, поршней, наполнительных клапанов, шлангов и т.д.) невозможно ис­пользовать контактные методы. В таких случаях рекомендуется делать смывы с поверхностей. При смыве точность исследования повышается - все бактерии с исследуемой поверхности снимаются стерильным тампоном и переносятся на слой твердой питательной среды. Существенное преимущество по сравне­нию с методом агаровых контактных чашек состоит в том, что если исследуе­мые поверхности сильно загрязнены, можно сделать разведения полученно­го материала и тем самым упростить подсчет колоний.

Для того чтобы стерильный тампон мог собрать микроорганизмы с иссле­дуемой поверхности, его необходимо смочить физиологическим раствором. В идеале раствор, которым смачивают тампон (0,9% водный раствор NaCI), уже должен содержать смесь, инактивирующую консерванты: 3% твина-80, 0,3% лецитина и 0,1% гистидина. Далее микроорганизмы переносят с тампона на твердую питательную среду (бактерии лучше растут на казеиново-соевом пептонном агаре, а грибы - на среде Сабуро). Для переноса микроорганизмов тампон трут о поверхность питательной среды; этот способ переноса самый быстрый, самый простой и позволяет выявлять даже незначительные уровни контаминации на исследуемой поверхности.

Есть и альтернативный способ переноса микроорганизмов: тампон поме­щают в буферный раствор (0,9% NaCI с добавлением смеси для дезактивации консервантов). Если исследуемая поверхность сильно загрязнена, раствор, содержащий бактерии, можно дополнительно разбавить. В конечном итоге общее микробное число определяют, нанося аликвоты раствора на поверх­ность или вглубь агара разливом на твердую среду или методом глубинного посева, соответственно. При посеве разливом на твердую среду объём алик­воты не должен превышать 0,5 мл.

Преимущество экстракции после смыва тампоном состоит в том, что мож­но разбавить суспензию микроорганизмов и поместить полученные аликвоты на несколько чашек сразу. Тем самым можно выявить наличие сразу несколь­ких видов микроорганизмов, высаживая аликвоты на селективные среды и культивируя их при разных условиях.

10.1.3. Фильтрация, посев методом разлива и глубинный посев.

Эти процедуры проводятся для подсчета общего количества бактерий в твердых или жидких материалах.

10.1.3.1. Определение общего числа микроорганизмов в исследуемом про­дукте методом разлива или глубинного посева.

К исследуемому материалу (сырью или косметической продукции) добав­ляют буфер для разведения с достаточной концентрацией добавок, дезакти­вирующих консерванты. Для того чтобы тщательно размешать смесь, её встря­хивают или перемешивают с помощью мешалок и гомогенизаторов.

Аликвоты полученных растворов переносят на поверхность твердой пита­тельной среды с помощью шпателя Дригальского или аппарата для спираль­ного посева. Альтернативой методу посева на поверхность служит метод глу­бинного посева.

10.1.3.2. Определение общего числа микроорганизмов методом мембран­ных фильтров.

Определенный объём материала, пригодного для фильтрации (вода; очи­щающие и дезинфицирующие средства; вода, использующаяся для промывки; сырьё или косметические продукты, пригодные для фильтрации), пропускают через мембрану, диаметр пор которой составляет 0,22 мкм (для анализа воды) или 0,45 мкм. Далее фильтр промывают буферным раствором (например, 0,9% NaCI, рН 7.0) и помещают на твердую питательную среду подходящего состава.

Методу мембранных фильтров следует отдавать предпочтение, поскольку:

• Меньше влияние остаточных консервантов.

• Порог обнаружения микроорганизмов ниже, так как исследуются пробы большего объёма.

• Проще осуществлять подсчет микроорганизмов.

• Проще изолировать колонии.

В буферный раствор для разбавления исследуемых материалов рекомен­дуется добавлять смесь соединений, подавляющих действие консервантов, чистящих и дезинфицирующих средств (например, 3% твина-80, 0,3% лецити­на, 0,1% гистидина, 0,5% тиосульфата натрия). Кроме того, рекомендуется до­бавлять дезактивирующую смесь в состав питательной среды (можно приоб­рести готовые чашки с агаром и дезактивирующими добавками).

Для выращивания культур мезофильных аэробных бактерий обычно ис­пользуется казеиново-соевый пептоный агар (CASO), а для выращивания культур грибов хорошо подходит среда Сабуро. Чашки с посевами бактерий инкубируют при 30-35°С в течение 2-4 дней, а чашки с посевами грибов при 20-25°С в течение 3-7 дней.

10.1.4. Экспресс-методы.

Для того чтобы колонии, посеянные на питательную среду, выросли, требу­ется, по меньшей мере, 24 часа инкубации (в зависимости от типа и физиоло­гического статуса клеток). Именно поэтому все микробиологические методы, связанные с культивированием, требуют значительных затрат времени. Гри­бы растут ещё медленнее, не меньше трёх дней. Следовательно, результаты культивирования, значимые для мониторинга гигиены, приобретают ретро­спективный характер и не позволяют быстро применять необходимые меры в том случае, если допустимый уровень микробиологического загрязнения превышен.

Для поддержания санитарно-гигиенического статуса производства гораз­до полезнее использовать методы, позволяющие узнать о микробиологиче­ской чистоте исследуемого объекта (например, какой-либо поверхности) как можно быстрее, чтобы можно было успеть исправить возможные недочеты в системе поддержания гигиены (например, чтобы быстро провести дополни­тельную очистку и дезинфекцию поверхности).

При осуществлении микробиологического контроля состояния сырья и нерасфасованной продукции предпочтение отдаётся тем аналитическим ме­тодам, которые позволяют быстро установить микробиологическое качество исследуемой продукции. Чем быстрее получена информация, тем быстрее можно исправить ситуацию и спасти компанию от крупных трат. Так, напри­мер, можно успеть заменить загрязнённое бактериями сырьё или вовремя прекратить затаривание загрязнённой нерасфасованной продукции.

В течение последних нескольких лет экспресс-методы анализа постоянно совершенствуются и в настоящее время во многих ситуациях стали конкурен­тоспособной альтернативой традиционным методам. Полный перечень и опи­сания экспресс-методов представлены в главе 9.

В этой главе речь пойдёт об экспресс-методах, пригодных для мониторин­га гигиены завода.

10.1 .4.1. АТФ-биолюминесценция.

Данный количественный метод определения уровня контаминации в исследуемом материале основывается на определении присутствия АТФ (аденозин-5'-трифосфата). АТФ обнаруживается во всех живых клетках, будь то клетки животных, растений или микроорганизмов. Следует помнить, что метод АТФ-биолюминесценции не позволяет отличить АТФ, содержащийся в клетках растений или животных, от АТФ из клеток микроорганизмов.

Метод основан на ферментной реакции: АТФ реагирует с системой суб­страт/фермент (люциферин + люцифераза), и в результате этой реакции выде­ляется свет, который регистрируется с помощью люминометра. Свечение вы­ражается в «относительных световых единицах» и коррелирует с количеством АТФ в образце. Подробно этот метод описан в главе 9.4.

Было показано, что метод АТФ-биолюминесценции хорошо подходит для оценки уровня контаминации поверхностей в рамках мониторинга гигиены производства. Метод, использованный авторами, позволяет проводить ана­лиз прямо на месте сбора образца, с помощью портативного биолюминоме-тра. Оценка загрязненности поверхности проводится в три стадии:

По участку исследуемой поверхности (10 см X 10 см) проводят стериль­ным тампоном, смоченным в специальном растворе. Далее тампон помещают в стерильную пробирку, держат там 60 секунд для растворения клеточных сте­нок и высвобождения АТФ

Тампон погружают в реакционную смесь, содержащую люциферин и лю-циферазу, и инкубируют в течение 30-60 секунд

Тампон возвращают в первую пробирку, которую помещают в камеру для проб биолюминометра. Далее проводят подсчет относительных световых единиц.

Сравнения методик, основанных на культивировании на питательных сре­дах, с методом АТФ-биолюминесценции показали, что между данными мето­дами существует значительная корреляция. У метода АТФ-биолюминесценции есть только один недостаток: АТФ содержится не только в живых клетках, но и в некоторых мертвых материалах биологического происхождения. Поэтому при измерении биолюминесценции высок риск ложноположительного ре­зультата, если исследуемая поверхность была загрязнена биологическим ма­териалом - даже в том случае, когда живых клеток на поверхности не осталось.

Многие производители в настоящее время выпускают биолюминометры, пригодные для мониторинга гигиены на производстве.

10.1.4.2. Измерение импеданса.

Этот метод основан на измерении электрического сопротивления пита­тельной среды, в которой культивируются микроорганизмы. В ходе роста и метаболической активности микроорганизмы перерабатывают высокомоле­кулярные соединения. Образуются ионы, которые микроорганизмы секретируют в среду. В присутствии этих ионов проводимость среды увеличивается, а электрическое сопротивление уменьшается. С помощью этого метода можно различать разные виды микроорганизмов. Для этого нужно использовать се­лективные среды и условия культивирования, а также анализировать кривые импедансного сигнала. Подробное описание метода см. в главе 9.4.

10.1.5. Определение общего числа микроорганизмов в воздухе.

10.1.5.1. Седиментационный метод.

Это самый простой способ определить общее число микроорганизмов в воздухе, основанный на механическом оседании микроорганизмов. Чашку с агаром на определенное время оставляют открытой, и микроорганизмы, содержащиеся в воздухе, оседают на агар. Согласно литературным данным, время осаждения может составлять от 30 минут до 4 часов. Для того чтобы полученные результаты было проще сравнивать друг с другом, время осаж­дения всегда должно быть одинаковым. После того, как время осаждения за­кончилось, чашки закрывают, инкубируют и подсчитывают число колоний на поверхности агара.

Основной недостаток этого метода заключается в том, что определяемое число бактерий никак нельзя связать с объёмом воздуха, в котором эти бакте­рии содержатся. Следовательно, седиментационный метод - качественный, а не количественный. Кроме того, скорость оседания прямо пропорциональна квадрату радиуса (закон Стокса), и поэтому крупные микроорганизмы гораздо чаще выявляются с помощью метода седиментации, чем мелкие.

10.1.5.2. Другие методы.

Методы основаны на прокачке воздуха, содержащего микроорганизмы, через некое устройство. В отличие от седиментационного метода, эти мето­ды позволяют количественно определять концентрацию микроорганизмов в воздухе, сравнивая объём поглощённого воздуха и количество образовав­шихся колоний. Существует несколько методик выделения микроорганизмов из воздуха:

- Аспирация из воздуха на твердую питательную среду (импакторы)

- Аспирация из воздуха на жидкость (импинджеры)

- Фильтрация воздуха

Аспирация из воздуха на твердую питательную среду

Существует множество приборов для микробиологического анализа воз­духа, действующих по принципу аспирации, например, пробоотборники Казелла, Андерсена и Рейтера .Скорость отбора воздуха у пробоотборника Казелла достаточно высока (до 700 л воздуха/мин), и его обычно используют при обследовании помещений с низким уровнем контаминации, поскольку порог обнаружения у такой установки крайне низок (1 КОЕ/мЗ). Кроме того, для по­мещений с высоким требуемым классом чистоты подходит пробоотборник Андерсена. Оба упомянутых типа пробоотборников достаточно громоздки и тяжелы (13-16 кг), и редко используются для нужд косметической промышлен­ности, поскольку для косметического производства их чувствительность из­быточна.

Для нужд косметической промышленности чаще всего используется цен­тробежный пробоотборник Рейтера. Этот прибор весит всего 1,5 кг и может работать от аккумулятора. Внутрь пробоотборника вставляется плёнка, по­крытая агаром, и эта плёнка по периметру окружает лопасти вентилятора. Ло­пасти вентилятора засасывают воздух внутрь устройства, воздух центрифуги­руется за счет их вращения при определенном количестве оборотов в минуту, и содержащиеся в воздухе частицы на большой скорости ударяются в агар. Объём исследуемого воздуха зависит от времени аспирации. Можно задать объём воздуха, аспирируемого за определенное время; объём аспирации ва­рьируется от 10 л до 1 мЗ. Этот метод анализа подходит для мониторинга гиги­ены заводов и согласуется с требованиями GMP.

Другие способы подсчета общего числа микроорганизмов в воздухе (аспи­рация из воздуха на жидкость и фильтрация) редко используются для нужд косметической промышленности, так как они намного сложнее и требуют больших усилий, чем метод с использованием пробоотборника Рейтера.

10.1.6. Определение видов бактерий.

Для полноценной оценки санитарно-гигиенического статуса производ­ства, в особенности на ранних стадиях создания системы мониторинга гиги­ены, рекомендуется классифицировать основные типы микробиологических загрязнителей и, при необходимости, определить их видовую принадлеж­ность. Классификация микроорганизмов производится за счет культиви­рования на селективных средах (агар с цетримидом для культивирования псевдомонад, агар МакКонки или агар с жёлчью и фиолетовым красным для культивирования энтеробактерий, агар Байрд-Паркера для культивирования стафилококков, и т.д.).

Определение рода и вида микроорганизмов осуществляется с помощью более сложных систем опознавания, выпускаемых некоторыми компаниями (например, APJ systems). 

10.2. Организация и проведение проверок гигиены.

10.2.1. Система предотвращения ошибок

В директивах по GMP в косметическом секторе, упомянуты принципы планирования уровня качества и предотвращения ошибок (то есть основные принципы выявления рисков и потенциальных пробелов в санитарно-гигие­нической системе, а также подбора и реализации мер, корректирующих ситу­ацию). Однако эти директивы преимущественно касаются методов выявления ошибок (например, проверок сырья и готовой продукции).

В отличие от упомянутых директив, система НАССР (система анализа ри­сков и критических контрольных точек, см. подробнее главу 1) фокусируется на предотвращении возникновения ошибок. Эта система активно использует­ся в пищевой индустрии и при анализе видов и последствий отказов (FMEA), разработанном в автомобильной промышленности для управления каче­ством продукции. Упреждающие системы предотвращения ошибок уже много лет используются в пищевой индустрии. Они позволяют защитить продукты от микробиологической контаминации, избежать связанных с контаминацией денежных затрат и сохранить репутацию компании.

Нет смысла полностью переносить принципы НАССР на реалии космети­ческого производства: необходимые затраты труда неоправданно велики, а факторы риска в этом секторе другие (см. также главу 1). При этом исполь­зование основных принципов НАССР (и FMEA) позволит избежать ошибок на стадии разработки, и, что особенно важно, на стадии производства космети­ческой продукции.

К разработке системы защиты от ошибок следует привлекать представите­лей всех заинтересованных отделов. В зависимости от поставленной задачи, в команду должны входить представители отдела разработки продуктов, отде­ла контроля качества, технического отдела, складского отделения, производ­ственного отдела, отделения розлива, отдела микробиологического контроля, аналитического от дела, и так далее (18).

При реализации принципов НАССР особое внимание следует уделять про­изводственному процессу, существенно влияющему на санитарно-гигиениче­ское состояние завода. Именно в производственном процессе выделяются ги­гиенические контрольные точки (тоже, что и критические контрольные точки, см. ниже), и именно к нему применяются основные меры по поддержанию ги­гиены. Критические контрольные точки (ККТ) - это точки/зоны или временные промежутки процесса, контроль состояния которых позволит уменьшить или полностью исключить риски, связанные с косметической продукцией и её по­требителями.

10.2.1.1. Принципы НАССР.

Суть НАССР заключается в мониторинге производственного процесса и в выявлении опасных ситуаций, способных увеличить риск ошибки при про­изводстве. В качестве контрольных точек обычно выступают специфические процессы, при выполнении которых высока вероятность ошибки. НАССР ра­ботает с опасными факторами как биологического (бактерии, грибы, токсины), так и небиологического (физическо-химические параметры, инородные объ­екты) происхождения.

При анализе процессов и проведении оценки рисков нужно учитывать чувствительность рассматриваемого косметического продукта. Для просто­ты можно классифицировать продукты по группам риска. Риск в трактовке НАССР - это вероятное событие, способное принести ущерб (см. «Оценка ри­сков» ниже).

После того, как анализ рисков был проведен, необходимо определить критические контрольные точки (ККТ). ККТ - это точки, в которых необходимо применять особые меры для предотвращения выявленных ранее рисков. В пищевой индустрии принято делить все ККТ на две категории (6):

ККТ 1: критические контрольные точки, в которых можно убедиться в ис­ключении риска.

ККТ 2: критические контрольные точки, в которых нельзя получить досто­верное свидетельство об исключении риска.

При выборе способов мониторинга следует отдавать предпочтение бы­стрым физико-химическим методам (например, измерению показателя рН, измерению температуры, измерению вязкости), поскольку эти аналитические методы гораздо быстрее, чем привычные методы культивирования, и, следо­вательно, лучше вписываются в упреждающую концепцию, то есть позволяют быстро выявить риск ошибки и устранить его с помощью корректирующих мер.

Многие методы микробиологического экспресс-анализа, например, АТФ-биолюминесценция или измерение импеданса, за последнее время были от­лажены и стали пригодными для мониторинга гигиены согласно концепции НАССР.

После определения ККТ и разработки процедур мониторинга необходимо установить критические пределы для каждого контрольного параметра и раз­работать корректирующие действия, которые будут осуществляться при пре­вышении установленных критических пределов.

Необходимо четко установить ответственность за проведение мониторин­га, организацию и применение корректирующих мер.

Оценка рисков.

Концепция основывается на тщательном анализе и оценке рисков в крити­ческих точках на всех этапах жизненного цикла продукции.

1.Анализ возможных дефектов продукции.

A.Анализ возможных отклонений продуктов от стандарта качества

Б. Анализ возможных рисков для здоровья, вызванных этими отклонени­ями

B.Анализ предыдущего опыта работы с данным типом продукции

Г. Проверка каждой стадии производственного процесса (анализ произ­водственного потока, схем систем, списка используемого сырья, специфика­ций на продукты и сырьё)

Д. Пакет документации по безопасности готовой продукции

2. Анализ рисков для здоровья, вызванных дефектами продуктов

A.Способ использования продукта (смывается после нанесения или нет)

Б. Область нанесения (глаза - кожа - слизистые оболочки - проблемные

зоны кожи, например, акне)

B.Восприимчивость группы, для которой предназначена продукция, к заболеваниям (группы риска: дети, больные люди, пожилые люди, люди с нарушением иммунной системы)

Г. Предсказуемые способы неправильного использования

Д. Возможность устранения дефектов продукции после изготовления (на­пример, за счет переделки нерасфасованной партии продукции)

Примеры критических контрольных точек.

Ниже приведена информация о некоторых важных критических точках в процессе производства косметической продукции:

Одной из основ системы НАССР является уверенность в качестве сырья (в особенности это относится к воде). Сырьё не должно быть загрязнено био­логическими (микроорганизмы, токсины) или химическими (побочные про­дукты синтеза) примесями. Качество готовой продукции определяется тем, насколько сырьё соответствует спецификациям.

Вода - важнейший вид сырья, поэтому необходим постоянный монито­ринг её качества с использованием как аналитических (рН, проводимость), так и микробиологических методов. Выбор способа мониторинга зависит от типа противомикробной обработки воды.

Тип обработки воды

Способ мониторинга

Нагрев

Измерение температуры

Облучение

Измерение дозы облучения

Фильтрация

Проверка эффективности работы фильтра за счет измерения дифференциального давления

Химическая дезинфекция

Проверка концентрации и времени действия дезинфицирующих средств

Ещё одной важной ККТ является производственный процесс. В таблице ниже указаны лишь некоторые проблемы, вызываемые неполадками в про­цессе производства.

Тип ошибки

Эффекты

Добавлено не то сырьё

Некачественная продукция

Сырьё добавлено в неправильной концентрации

Различные; например, если концентрация консервантов выше требуемой, они могут вредить здоровью потребителей, а если концентрация консервантов ниже требуемой, они будут неэффективны

 

Неправильный рН

- Эффективность некоторых консервантов (например, сорбиновой или салициловой кислоты) зависит от показателя рН

- Составы со слишком высоким/низким показателем рН раздражают кожу и слизистые. Изменения рН особенно опасны в составе детской косметики или косметики, наносимой на кожу вокруг глаз и на слизистые оболочки.

Жесткость воды

Влияет, в частности, на эффективность консервантов

Неправильный температурный режим

- При перегреве могут образовываться ядовитые вещества

- Разрушается система консервантов

 

Все перечисленные параметры легко контролировать с помощью физико-химических аналитических методов, и все они играют большую роль в различ­ных системах анализа рисков.

В графике уборки и дезинфекции всегда должны быть указаны концентра­ции и способы применения чистящих и дезинфицирующих составов (темпера­тура, время нанесения, время экспозиции, и так далее).

При проведении уборки и дезинфекции следует отдавать предпочтение автоматизированным способам, например, мойке без разборки, если эффек­тивность таких способов была доказана.

Ряд типичных проблем, возникающих в процессе уборки и дезинфекции, необходимо включить в перечень ККТ. Примеры таких проблем: забиваются наконечники, уменьшается производительность насосов, образуются зоны, на которые не попадают распыляемые средства, и плохо промываются глухие концы систем.

Согласно принципам НАССР, при ведении документации нужно состав­лять графики санитарно-гигиенических мероприятий для всех помещений, производственных систем и для всех сотрудников производства.

10.2.2. Персонал

Микробиологическая безопасность косметической продукции во многом зависит от сотрудников, занятых на производстве.

Во-первых, риск контаминации значительно возрастает из-за ошибок, до­пущенных при работе с сырьём или нерасфасованной продукцией, а также в ходе производства и при отборе проб. Во-вторых, все люди являются перенос­чиками микроорганизмов, и могут стать причиной контаминации сырья или готовой продукции.

Особенно важно контролировать действия сотрудников, непосредствен­но контактирующих с нерасфасованной продукцией, а именно:

- Сотрудников производственного отдела и упаковочно-фасовочного цеха

- Сотрудников, отвечающих за техобслуживание, очистку и дезинфекцию производственных и наполнительно-разливочных машин

- Специалистов отдела разработки, исследующих производственный процесс

- Специалистов отделов микробиологии, контроля и обеспечения каче­ства, отбирающих пробы и проводящих анализы.

В пищевой индустрии (согласно немецкому постановлению о заразных бо­лезнях) и в Фарминдустрии (согласно требованиям GMP и немецкому закону о фармацевтической продукции) сотрудники перечисленных выше отделов обязаны регулярно проходить медицинские осмотры (например, проверку на наличие сальмонеллы). Представляется разумным ввести обязательную дис­пансеризацию и для сотрудников, занятых на косметическом производстве.

Личная гигиена сотрудников, контактирующих с продуктами, должна регу­лярно проверяться. Особое внимание нужно уделять следующим параметрам:

- Одежда должна быть чистой

- При необходимости нужно надевать защитную спецодежду (перчатки, сменную обувь, бахилы, головные уборы, набородники и т.д.)

- Нельзя пользоваться декоративной косметикой

- Нельзя есть, пить и курить в производственных помещениях

- Необходимо выполнять все требуемые санитарно-гигиенические меры (мыть и дезинфицировать руки, и т.д.).

Необходимо вести учет посещения на всех тренингах и обучающих курсах, посвященных гигиене, чтобы удостовериться, что сотрудники получили всю необходимую информацию.

Для того чтобы привлечь внимание сотрудников к вопросам личной ги­гиены, можно проводить бактериологический контроль персонала. Этим же способом можно наглядно доказать смысл и эффективность принятых на про­изводстве гигиенических мер: например, брать смывы рук сотрудников до и после мытья и дезинфекции. Результаты проведенного исследования можно включить в курс обучения основам гигиены - они будут прекрасным демон­стративным материалом.

Для проверки личной гигиены сотрудников чаще всего используются сле­дующие виды анализа:

- Метод снятия отпечатков с рук персонала

- Метод агаровых контактных пластин для снятия проб с рабочей одежды (халатов, ботинок, и т.д.)

Снятие отпечатков с рук персонала.

Снятие отпечатков - самый простой способ микробиологического контро­ля состояния рук персонала. Отпечатки пальцев можно делать на поверхно­сти твердой питательной среды, а отпечатки ладоней - на чашках RODAC.

Альтернативой контактного метода служит метод смыва тампоном. Для смыва исследуемую область руки потирают стерильным тампоном, смочен­ным в солевом растворе (например, 0,9% NaCI, 0,1% пептона, 0,05% твина-80). Далее тампон помещают в 1-10 мл солевого раствора, экстрагируют микроор­ганизмы в раствор, и аликвоты полученной суспензии помещают на твердую питательную среду для культивирования.

При проведении микробиологических проверок персонала следует осо­бенно внимательно проверять образцы на наличие энтеробактерий и грампо-ложительных кокков (стафилококков, стрептококков).

Для обнаружения энтеробактерий рекомендуется использовать агар Мак-Конки или агар с жёлчью и фиолетовым красным, а для обнаружения стафи­лококков подходит агар Байрд-Паркера. Эти среды используются наряду со стандартным казеиново-соевым пептонным агаром, подходящим для выра­щивания аэробных мезофильных бактерий. Чашки с агаром инкубируют в те­чение 48-72 часов при 30-35°С.

Метод контактных пластин для выявления контаминации одежды персонала.

Процедуру обычно проводят с помощью контактных чашек (например, ча­шек RODAC), хотя в некоторых случаях удобнее использовать гибкие контакт­ные плёнки (например, Biotest GK-A) (см. 10.1.1).

10.2.3. Помещения.

Мониторинг гигиены обязательно должен включать в себя проверку са­нитарно-гигиенического состояния помещений, в которых обрабатываемое сырьё, нефасованная и готовая продукция непосредственно контактируют с воздухом, а именно:

Развесочных

Помещений для хранения сырья, в которых отбираются образцы Производственных помещений Упаковочно-фасовочных помещений.

Кроме того, необходимо проверять санитарно-гигиенические условия в раздевалках и в системах двойных дверей.

В ходе микробиологических проверок помещений особое внимание нуж­но уделить состоянию воздуха и уровню загрязненности поверхностей.

10.2.4. Производственные системы.

В главе 3 достаточно подробно описаны все мероприятия, необходимые для поддержания гигиены производственных систем.

При оценке качества уборки и дезинфекции, а также при проверке чи­стоты производственных и наполнительно-разливочных машин необходимо проводить визуальный контроль. Микробиологические методы проверки требуют затрат времени, а визуальные проверки проводятся практически мо­ментально, и поэтому лучше вписываются в плотный производственный гра­фик. Однако точность визуального контроля не слишком высока, поэтому при необходимости более точной быстрой проверки можно пользоваться экс­пресс-методами, например, методом АТФ-биолюминесценции.

При проведении визуального контроля или при проверке микробиоло­гическими методами особое внимание нужно уделять тем частям производ­ственных систем, которые труднее всего очищаются, то есть перемычкам, гибким подводкам, местам, недоступным для очистки (например, участкам систем, моющихся без разборки, которые не омываются чистящим средством из распылительных головок).

Таблица. 2

Потенциальные контрольные точки для составления расписания гигиениче­ских проверок в косметической промышленности.

=

Помещения

Контрольные точки

Методы

=

Все помещения,

Воздух

Седиментация на агар или

1

в которых сырьё

 

пробоотборники, забирающие бактерии

=

и продукты

 

из воздуха (см. 10.2.4).

1

контактируют с

 

 

воздухом

 

 

i

Развесочные

Весы

Контактные пластины или смыв (см.

1

 

 

10.1.1 и 10.1.2)

1

Помещения/

Упаковки/контейнеры/

Контактные пластины или смыв (см.

1

цистерны для

цистерны для хранения сырья

10.1.1 и 10.1.2)

1

хранения сырья

 

 

E

 

Сырьё

Метод мембранных фильтров, посев на

I

 

 

агар разливом, глубинный посев

E

Производственные

Части производственных

Контактные пластины или смыв (см.

 

помещения

машин, в которых находятся

10.1.1 и 10.1.2)

=

 

обрабатываемые продукты

 

E

 

Чаны для хранения

Контактные пластины или смыв (см.

1

 

 

10.1.1 и 10.1.2)

1

 

Нефасованные продукты

Метод мембранных фильтров, посев на

|

 

 

агар разливом, глубинный посев

E

 

Вода

Метод мембранных фильтров

|

Склад для хранения

Нефасованные продукты

Метод мембранных фильтров, посев на

E

нерасфасованных

 

агар разливом, глубинный посев

E

продуктов

 

 

E

 

Некоторые составные части

Смыв (см. 10.1.2)

E

 

контейнеров для хранения

 

E

 

нерасфасованной продукции:

 

§

 

соединительные детали,

 

i

 

участки с резьбой

 

в

Упаковочно-

Части наполнительно-

Контактные пластины или смыв (см.

1

фасовочные

разливочных машин,

10.1.1 и 10.1.2)

1

помещения

в которых находятся

 

I

 

обрабатываемые продукты

 

E

 

Части аппаратов,

Смыв (см. 10.1.2)

 

разливающих в готовые

 

s

 

упаковки (наполнительные

 

E

 

клапаны, гибкие подводки)

 

=

Шлюзы для

Проверка критических

Контактные пластины или смыв (см.

E

персонала и

поверхностей

10.1.1 и 10.1.2)

E

материалов

 

 

  

10.2.5. Воздух.

Опытным путем было установлено, что воздух внутри помещения редко становится источником контаминации продукта, защищенного хорошо подо­бранными консервантами и обрабатываемого в закрытых производственных системах. В то же время воздух, как и все прочие параметры системы микро­биологической безопасности, должен удовлетворять минимальным требо­ваниям микробиологической чистоты. Рекомендуется регулярно (например, еженедельно) определять общее микробное число в воздухе в критических зонах.

Пробы воздуха необходимо отбирать в тех местах, в которых влияние по­сторонних факторов (кондиционеров, вентиляции и т.д.) минимально. При анализе проб следует учесть, что действия персонала, находившегося в поме­щении в процессе забора проб, могли существенно повлиять на полученный результат. Кроме того, определяемое общее микробное число воздуха сильно зависит от передвижения материалов по помещению и от чистоты поверхно­стей.

10.3. График санитарно-гигиенических мероприятий.

В графике санитарно-гигиенических мероприятий должны быть приведе­ны требования по уборке и дезинфекции помещений (УиД).

В этом графике должны содержаться ответы на следующие вопросы:

- Кто будет проводить проверки?

- Когда и как часто должны проводиться проверки?

- Как будут проводиться проверки (с помощью каких методов)?

- Кто будет предпринимать корректирующие действия, если критические пределы превышены?

- Какие корректирующие действия нужно принимать в этом случае (повто­рение УиД, временная остановка производственного процесса, дополнитель­ные проверки и т.д.)?

В инструкции по проведению УиД должны быть освещены следующие во­просы:

- Частота проведения УиД

- Используемые материалы (в том числе рабочие концентрации очищаю­щих и дезинфицирующих средств, их стойкость)

- Температура и время экспозиции в процессе УиД

- Ответственность за выполнение предписаний

- Документация сделанной работы (с подписью сотрудника, проводившего УиД).

Кроме перечисленных пунктов, проверки проведения санитарно-гигиени­ческих мероприятий должны включать:

- Регулярную проверку полноты документации по УиД

- Проверку правильной и четкой маркировки емкостей со средствами для очистки и дезинфекции

- Аналитический контроль концентраций и времени хранения стандарт­ных разведений растворов для УиД.

Необходимая частота проведения таких проверок определяется опытным путем и подстраивается под процесс УиД. Если процессы уборки и дезинфек­ции автоматизированы (мойка без разборки, автоматическое разведение ра­бочих растворов) и прошли валидацию, то нет необходимости регулярно про­верять перечисленные выше контрольные параметры.

Контрольные точки, в которых должны отбираться пробы, должны быть четко обозначены и при необходимости отмечены на планах здания и на схе­мах рабочих установок. Кроме того, необходимо четко обозначить время (до или после уборки, после простоя системы) и периодичность проверок (еже­дневно, после каждой смены, еженедельно, и т.д.). Способ проверки тоже дол­жен быть обозначен (визуальная проверка, микробиологический метод, и т.д.). Аналитические и микробиологические методы должны быть подробно описа­ны и разъяснены. Это делается для того, чтобы анализы всегда проводились единообразно: только в таком случае результаты анализов можно сравнивать.

График санитарно-гигиенических мероприятий необходимо ежегодно пересматривать. Кроме того, его необходимо пересматривать в случае изме­нения производственного процесса, при перестройке помещений, модифи­кации производственных систем, а также при начале производства принци­пиально новых продуктов или при существенном изменении производимых продуктов (изменении состава, изменении качества сырья и т.д.).

10.4. Рекомендуемые значения параметров

В законодательстве не указаны ни требуемая регулярность проведения проверок санитарно-гигиенического состояния, ни рекомендуемые значения проверяемых параметров. Компания-производитель полностью отвечает за интерпретацию результатов проверок санитарно-гигиенического состояния производства. Сотрудники, проводящие мониторинг и ответственные за при­нятие корректирующих мер, обязательно должны обладать необходимыми знаниями и опытом.

10.4.1. Воздух.

Требования к микробиологической чистоте воздуха в помещениях могут существенно различаться в зависимости от типа рабочего процесса, от тех­нических систем, от условий в помещениях, от свойств вентиляции и систем обработки воздуха. Общее количество микроорганизмов в помещениях, ис­пользуемых для производства дерматологических средств, не должно превы­шать 200 КОЕ/мЗ.

В таблице приводятся полезные для косметической индустрии предель­но допустимые значения для производственных помещений, установленные методом седиментации (время экспозиции - 30 минут, диаметр чашек - 9 см).

В директиве по GMP в сфере производства медицинских продуктов ЕС установлены следующие микробиологические показатели безопасности в чи­стых зонах, не критичных для производства:

- Для проб, отобранных пробоотборником: 100-200 КОЕ/мЗ

-Для проб, отобранных методом седиментации (плашки диаметром 90 мм) после 4 часов экспозиции: 50-100 КОЕ

10.4.2. Поверхности.

В качестве стандартного метода определения используются чашки RODAC (20 см2).

Поверхность контакта у чашек довольно мала (9-25 см2 в зависимости от типа чашки), поэтому метод агаровых контактных чашек следует скорее счи­тать качественным, чем количественным. Этот тест не может предоставить точную информацию об уровне загрязненности всей исследуемой поверхно­сти.

Некоторые авторы предложили сделать этот метод полуколичественным и ввести градацию уровней контаминации в зависимости от количества коло­ний, выросших на контактной поверхности агара.

Для поверхностей, которые не входят в контакт с продуктом и не подвер­гаются дезинфекции, микробиологические показатели безопасности обычно составляют порядка 40-60 КОЕ/25 см2. Для контактирующих с продуктом и регулярно дезинфицируемых поверхностей микробиологические показатели безопасности не должны превышать 5-10 КОЕ/25 см2.

10.5. Документация

Результаты проверок санитарно-гигиенического состояния необходимо фиксировать в письменном виде и сопровождать подписью сотрудника, про­водившего проверку. В косметическом секторе требуется дополнить документ скрепляющей подписью руководителя группы или ответственного сотрудни­ка, контролирующего санитарно-гигиенические условия производства.

Для простоты и удобства ведения документации рекомендуется раздавать сотрудникам формы, в которых уже перечислены все контрольные точки про­верки и приведены все необходимые для заполнения поля. В таких формах на­много проще делать отметки о результатах проверки, ставить дату и подпись.

Расположение архива и регулярность сдачи документов в архив остаёт-
ся на откуп компании. При установлении регулярности сдачи документов в
архив необходимо учитывать, что все эти документы могут пригодиться при
поиске источников контаминации. Кроме того, они нужны для статистической
оценки результатов обучения сотрудников и применения санитарно-гигиени-
ческих мер.

Таблица 4.

Схема оценки общего числа мезофильных аэробных микроорганизмов

по стандарту DIN 10113-3 «Подсчет колоний на поверхностях оборудования и инструментов»